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類器官厚樣本成像,徠卡共聚焦系統解決方案第一彈

更新時間:2024-04-10      點擊次數:110

自21世(shi)紀初,隨著干細胞研究和組(zu)織工程的(de)重大突破,類器官及(ji)其在(zai)顯微成像中的應用取得了(le)顯(xian)著進展。已(yi)開(kai)發的多種類器官模型,如大腦、肝臟和腸(chang)道(dao)類(lei)器官,為(wei)研究器官發育、疾(ji)病機制(zhi)揭示及治療評估提供(gong)了新途徑。同時(shi),類器官成像技(ji)術的發展極大地(di)促進了研(yan)究人員對這些復雜三(san)維結構細節動(dong)態模式進行觀察的(de)能力。盡(jin)管如此,類(lei)器官(guan)研究仍(reng)面臨多(duo)個(ge)挑戰(zhan),包括維持樣本活性確保成像深度分辨率,及處理分析大(da)量(liang)數據的需求[1][2]

視(shi)頻(pin)1.肺腺癌類器官樣本(ben),共(gong)聚焦四色成像,40x 甘油(you)鏡,拍攝厚(hou)度(du)71微(wei)米(144層(ceng)),樣本(ben)來源(yuan)伯楨(zhen)生物bioGenous

DAPI-細胞核CK7-細(xi)胞(bao)質F-ACTIN-細胞膜(mo)TTF1-細胞核(強增值性細胞)

共(gong)聚焦顯微鏡(jing)物鏡(jing)的(de)(de)發展,特別是用于觀察厚樣本的(de)(de)物鏡(jing),對匹(pi)配樣本和周圍介質的折射率至關重要,否則會影響成(cheng)像深度(du)。高數值孔徑的油浸物鏡(jing)雖然提供(gong)高分辨率,但(dan)當用于水樣本時由于折射率不(bu)匹配而面臨限制(zhi),導致球(qiu)面像差。這影響了能夠有效成像的樣(yang)本(ben)深度,并降低了圖像質量

圖片

圖1.折射率

為了解決這些挑戰,研究人員開始使用甘(gan)油作為一種折射率接近生物樣本的介質,將樣本置于甘油中,并使用甘油(you)物鏡進行成像。隨著技術的進步,甘油物鏡的設計和性能不斷改進,成為現代顯微鏡中常見的物(wu)鏡類型之一。


表1. 常見封片劑類型及其介質折射率的表格

封片劑類型

介質折射率

應用

水基封片劑

約1.33

水溶性樣(yang)本,如(ru)染色后的(de)細胞和組(zu)織切片

硅油

約1.40-1.41

活細胞成像和深度成像

VECTASHIELD®, ProLong®/ProLong® Gold

約1.44-1.46

抗淬(cui)滅(mie)封(feng)片劑,長時間保(bao)持(chi)熒光穩(wen)定性和減少光淬(cui)滅(mie)影(ying)響(xiang)

Fluoromount-GTM 

約1.45-1.47

常用的yongjiu性(xing)封片劑

Mowiol® 或PVA

約1.41-1.49

用于熒(ying)光標記樣本(ben),提供良好(hao)的(de)折射率匹(pi)配和穩定性

BABB, FocusClear, DBE

約1.45-1.56

用(yong)于透明(ming)化樣本的(de)成(cheng)像

如今,大多數固定樣本都使用基于甘油的Mowiol、Vectashield或類似混合物進行封片。這些介質的折射率接近80/20甘油/水混合物的折射率(ne=1.45)。甘油(you)物鏡(介質(zhi)折(zhe)射率1.46)是在這種介質(zhi)中封(feng)裝的(de)樣本的(de)更佳選擇。


由于折射率匹配,甘油物鏡減(jian)少了散射和(he)光(guang)損失(shi),在泛的波長范(fan)圍都具有較好的透(tou)明度,提高了圖像質量和信號強度,因此可實現更深(shen)(shen)的成(cheng)像深(shen)(shen)度(du)(見圖3)。


圖片

圖2. 甘油物(wu)鏡與水鏡成像效果對比(深度:200微米(mi)),樣本來源伯(bo)楨生物(wu)bioGenous


配合校正環,我們還可以調整光學系統以適(shi)應封裝介質的折射率變化,或者由于蓋玻片厚度溫度變化引起的折射率變化。


在本期中,我們深入了解了類器官成像領域,共聚焦顯微(wei)鏡(jing)物鏡(jing)的創新及其在觀(guan)測(ce)厚(hou)樣本(ben)中的重要應用。我們還探討了如何通過選擇與(yu)樣本折射率相匹配浸沒介質(zhi)來解決成像挑戰。甘油物鏡(jing)的應用充分證明了技術發展如何促進了成像質量(liang)和深度的(de)提(ti)升,開辟(pi)了研(yan)究的新視野。


第二期我們將進一步探索類器官研究中的綜合成像解決方案,涵蓋自動(dong)化樣本定(ding)位(wei)、高倍率成像的自動(dong)轉換、三維結(jie)構(gou)的高分辨(bian)率成像,以及如何借助AI圖像(xiang)分析軟件挖掘圖像中的深層信息。


我們邀請(qing)您(nin)繼續與(yu)我們同(tong)行,深入顯(xian)微成像技術的新(xin)領域,共同(tong)揭開細胞與(yu)生物分子(zi)研究的新(xin)奧秘。敬請(qing)期待我們的下一期內容,將(jiang)為您(nin)帶來更多(duo)精彩洞(dong)見。


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圖3. 肺腺癌類器官樣本,共聚焦成像,40x 甘油鏡,DAPI-細胞核F-ACTIN-細胞膜,樣本(ben)來(lai)源伯(bo)楨生(sheng)物bioGenous


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